Место качественной модификации метода ПЦР в первичной диагностике ИППП и контроле эффективности лечения

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) стала успешной во многом благодаря тому, что на современном рынке медицины появились новые промышленные тест-системы на основании новейших технологий. Такой технологический прорыв многократно упростил и ускорил ПЦР. Однако с появлением таких тест-систем появились и некоторые неоднозначные вопросы толкования, полученных этим способом результатов.

Помимо этого, данный метод имеет ряд недостатков. Десять или даже сто тестируемых копий микроорганизмов часто бывают недостаточными, чтобы возникла определенная болезнь. Положительный результат ПЦР без сопровождения особых клинических признаков болезни (часто отрицательный при применении других методов) вызывает сомнения в его абсолютной эффективности при применении в гипердиагностике. Актуальным также является вопрос о толковании полученных таким методом результатов, поскольку данный метод не в силах правдоподобно рассчитать динамику популяции возбудителя заболевания в процессе лечения.

Такие тест-системы были созданы для определения количества патогенов с помощью ЦПР. Однако они являются менее чувствительными, чем так называемые «качественные» методы, а также расход материалов при таком методе гораздо выше. Помимо этого, нередко во время применения действительных клинических расходных материалов возникают непредсказуемые ситуации, например, когда пробы, в которых меньшее количество требуемой ДНК, имеют более сильное свечение, чем те, в которых содержится больше ДНК.

Эта работа была создана специально для определенной цели: оценить, насколько эффективно качественное определение возбудителей инфекций, которые передаются половым путем (ИППП). Для этого сопоставляется частота обнаружения ИППП перед назначением лечения и уже в конце проведенной терапии.

Материалы и методы

Материалы и методы ПЦР

Все материалы для данной работы (моча, уретры, соскоб заднего свода влагалища и цервикального канала, аспираты из полости матки) были получены от 2112-и женщин, посетивших гинекологов в городе Хабаровске. 1747 женщин обращались к гинекологу в первый раз, а 365 женщин – вторично, уже после того, как вылечились. Объем анализов получился соответственно 6728, 6179, 549. Повторно этих женщин исследовали уже спустя 14 и более дней после проведенной терапии, а после хламидиоза – через 30 или более дней.

При методе ПЦР были использованы тест-системы, созданные в России (прозванные «горячим стартом»). Все, полученные таким методом, результаты фотографировались с помощью фотопленки Микрат-300. На нее фиксировали полосы амплифицированных фрагментов, которые невидны невооруженным взглядом. Все результаты были обработаны и сохранены в системе управлений базами данных MS Access 97.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение

По результатам этих анализов обнаружилось, что хламидия трахоматис есть в организме у 20,5% женщин, а микоплазма хоминис у 31,8%. Частота обнаружения этих инфекций была практически одинаковой и у тех женщин, которые в первый раз посещали гинеколога и у тех, кто посещал вторично после прохождения терапии. Такой парадокс на самом деле не очень сложно объяснить. У женщин, которые приходили уже после лечения, изначально наличие возбудителя болезни было 100%-ным, а после терапии уменьшилось в три раза при микоплазме и в пять раз при хламидиях.

Анализы, взятые еще перед назначением лечения, показали, что у 9,3% женщин встречается микоплазма гениталиум (после терапии эта цифра уже составляет 6,4%). Данные для уреаплазма уреалитикум составляют 62,8% перед началом прохождения терапии и 53% после прохождения терапии. Также данные показали, что персистенция ЦМВ (цитомегаловируса) в цервикальном канале составляет 21,1% до назначения лечения и 13,3% после прохождения лечения. Данные для вируса обычного герпеса составляют соответственно 18,3% до лечения и 9,1% после прохождения терапии.

Данные результаты дают врачам представление об устойчивости разных микроорганизмов к лечению (в особенности с учетом того, что большое количество выборки в разных медицинских учреждениях упорядочило различия между разными способами лечения). При одном и том же обнаруженном количестве трихомонад и кандидозов перед началом назначения лечения (примерно 23%), после лечения первая инфекция найдена только у 14,3% женщин, а вторая инфекция — у 40% женщин. Такая картина показывает, что в современной жизни трихомониаз и триппер встречались гораздо меньше, чем остальные инфекции, передаваемые половым путем (это утверждает также и статистика в России). Однако кандидозы и бактериальные вагинозы настолько часто встречаются в современном мире (у 26% женщин), что некоторые гинекологи стали считать это практически нормой. К примеру, гарднерела вагиналис встречается очень часто, к тому же имеет достаточно большую устойчивость к лечению (примерно 50%), так же как и уреаплазма уреалитикум (53%). На третьем месте по устойчивости – микоплазма хоминис, о котором уже упоминалось выше.

Учитывая, безусловно, тот важный факт, что нельзя полностью доверять результатам, полученных методом ПЦР, в особенности для отдельных определенных случаев, решено было сделать попытку использовать его для достаточно больших групп женщин до начала терапии и после нее. В таком случае все отклонения от нормы будут отходить на второй план, поскольку при таком методе исследуется достаточно большая группа при обоих случаях. Тут начинает работать так называемый закон статистики для большой группы. Частота свечения полосы увеличенной пробы сравнивали с излучением амплифицированной пробы, которая соответствует контрольной ДНК 4 балла и 4+ балла. Невооруженным глазом можно увидеть на фотопленке, что свечение полосы амплификата составляет 1+. Другие определения в данном случае были в промежуточном положении.

По результатам данного исследования обнаруживается достаточно уникальная оценка интенсивности реакций, в особенности в группе хламидийных заболеваний. Если до лечения свечение полосы амплификации было достаточно ярко выраженным (в балльных интервалах – примерно одно и то же количество проб), то после прохождения терапии свечение было уже менее ярким (это отчетливо видно невооруженным глазом на фотопленке). После лечения видимых полос было в три раза меньше, чем до терапии. Вторично женщин исследовали спустя тридцать и более дней после прохождения лечения хламидиоза. В это время начинается замена клеток призматического эпителия и устранение уже погибших частичек инфекции. Однако данные результаты не показали существование полос до начала проведенной терапии. Благодаря этому факту выясняется, что полученные выводы не могли быть выведены вследствие технологических отклонений.

Та группа исследователей, которые игнорируют использование новейших технологий для фиксирования результатов (с помощью фотокамеры, видеокамеры или компьютера), должны обязательно учесть приведенные выше факты и сделать из них соответствующие выводы. При толковании результатов, полученных методом ПЦР, врачи не должны забывать об одном очень важном вопросе: хламидийные заболевания очень коварны. Они действительно опасны для здоровья женщин, в особенности в период беременности, а также для здоровья будущего ребенка даже при наличии маленького количества в организме.

Неизвестно в какой мере опасно наличие CMV и HSV в цервикальном канале, однако доказано, что их наличие играет большую роль в степени инфицирования ребенка во время родов, включая тех редких женщин, которые обладают серопозитивным иммунитетом. При первом инфицировании вирусное заболевание переносится гораздо тяжелее.

С толкованием выявления микоплазмы дела обстоят сложнее. К примеру, уреаплазмы могут существовать в течение достаточно долгого времени в урогенитальном тракте без особых явных патологических изменений. Раскрытие во время исследований большого количества микоплазм доказывает их 100%-ную патогенность. Помня о том факте, что у антибиотиков достаточно много побочных эффектов, нет большой необходимости лечения антибиотиками при наличии уреаплазмы (за исключением планирования беременности). В данном случае можно просто провести коррекцию иммунитета пациента. Несмотря на это, при воспалениях наличие уреаплазмы при отсутствии остальных патогенов, считается причиной возникновения болезни. Полученные в вышеуказанном анализе результаты также не оптимистичны: уреаплазма уреалитикум является самым устойчивым микроорганизмом к лечению. Многие врачи связывают наличие уреаплазм в цервикальном канале при беременности с разрывом водной оболочки и излитии амниотической жидкости раньше срока. В таких случаях лечение антибиотиками в профилактических целях уменьшала количество уреаплазм и также риск преждевременных родов.

Во время выявления патогенных бактерий очень важно помнить, что заболевание – это взаимодействие как микро, так и макроорганизма. В большинстве случаев разные определения являются взаимоисключающими. Инфекционная болезнь становится гораздо опасней при наличии небольшого объема патогенных бактерий, при активной совместной воздействии патогенов, а также при краткосрочном ослаблении иммунитета. Благодаря этому можно считать, что можно и нужно применять данный метод ПЦР для выявления патогенов во время урогенитальных заболеваний наряду с другими как качественными, так и количественными способами выявления инфекций. Конкретно этот метод эффективен не только при начальном диагностировании урогенитальных инфекций, но также для контроля после терапии. В симбиозе с остальными методами диагностирования данный метод показывает полноценную информацию для назначения дальнейшего эффективного лечения.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!: